کلونینگ و بیان بخش های آنتی ژنیک سیتوتوکسین مرتبط با ژن A (CagA) هلیکو باکتر پیلوری در باکتری اشرشیا کلی و امکان سنجی تولید IgY در زرده تخم مرغ
دسته: کشاورزیبازدید: 1 بار
فرمت فایل: docx
حجم فایل: 5144 کیلوبایت
تعداد صفحات فایل: 118
هلیکوباکتر پیلوری شایع ترین پاتوژن گوارشی است که نیمی از مردم دنیا را آلوده ساخته و مهمترین علت بیماریهای معده ایروده ای از جمله گاستریک مزمن، زخم معده و دوازدهه، سرطان معده و لنفوما است
قیمت فایل فقط 16,900 تومان
کلونینگ و بیان بخش های آنتی ژنیک سیتوتوکسین مرتبط با ژن A (CagA) هلیکو باکتر پیلوری در باکتری اشرشیا کلی و امکان سنجی تولید IgY در زرده تخم مرغ
هلیکوباکتر پیلوری شایع ترین پاتوژن گوارشی است که نیمی از مردم دنیا را آلوده ساخته و مهمترین علت بیماریهای معده ای-روده ای از جمله گاستریک مزمن، زخم معده و دوازدهه، سرطان معده و لنفوما است. ژن CagA (سیتوتوکسین مرتبط با ژن A) یکی مهمترین شاخصهای بیماری زای این باکتری است. در این مطالعه به منظور همانه سازی بخشهای آنتی ژنیک ژن CagA و بررسی تولید IgY در زرده تخم مرغ در ابتدا بر اساس برنامههای بیوانفورماتیکی قطعه حاوی اپیتوپهای اصلی ژن CagA به طول 996 جفت باز شناسائی شد سپس این قطعه به کمک PCR از ژنوم هلیکوباکتر پیلوری موجود در بیوپسی معده 30 بیمار مبتلا به این باکتری جدا شده و با استفاده از هضم آنزیمی به ناقل pET32a و سپس به داخل میزبانهای کلون سازی و بیانی وارد شد. نتایج توالی یابی کلونیگ موفق ژن CagA را نشان داد و در نهایت ترکیب پروتئینی بدست آمده توسط روش SDS-PAGE و دات بلات تائید شد. در مرحله بعد ترکیب پروتئینی بدست آمده به 3 مرغ از نژاد HY-LINE تزریق شد. تخم مرغها به مدت 10 هفته جمع آوری شدند و IgY تولید شده در زرده تخم مرغ آنها با استفاده از روش SDS-PAGE بررسی و تائید شد.
کلمات کلیدی: مهندسی آنتی بادی،کیت تشخیصی، ایمنوژنتیک
فهرست مطالب
1 مقدمه.. 1
1-1 اهمیت موضوع.. 1
1-2 اهداف تحقیق.. 4
2 بررسی منابع.. 5
2-1 مکملها و غذاهای عمل گرا.. 5
2-1-1 تفاوت غذای عمل گرا و مکمل غذائی.. 6
2-2 ایمنوگلوبین Y. 6
2-2-1 ایمنوگلوبین زرده ی تخم مرغ (IgY).. 7
2-2-2 ویژگیها.. 9
2-2-3 کاربردهای بیوآنالایتیک.. 9
2-2-4 استفاده در مواد غذائی.. 10
2-3 هلیکو باکتر پیلوری.. 11
2-3-1 علائم و نشانهها.. 11
2-3-2 میکروبیولوژی.. 12
2-3-3 ژنوم.. 13
2-3-4 زیرواحد CagA هلیکوباکتر پیلوری.. 14
2-3-5 نقش CagA در سرطان.. 15
2-3-6 پاتوفیزیولوژی.. 15
2-3-7 التهاب، ورم معده و زخم.. 16
2-3-8 جزیره بیماریزائی Cag.. 17
2-3-9 سرطان.. 18
2-3-10 آسیب شناسی.. 19
2-3-11 پیشگیری.. 19
2-3-12 درمان.. 20
2-3-13 پیش بینی بیماری.. 21
2-3-14 بقاء هلیکوباکتر پیلوری.. 22
2-3-15 همه گیر شناسی باکتری (Epidemiology).. 24
2-4 آنتی ژنها.. 25
2-4-1 ساختمان آنتی ژن.. 25
2-5 اپی توپها.. 26
2-5-1 انواع اپی توپها.. 26
2-5-2 عملکرد.. 27
2-5-2-1 اپی توپهای سلول T.. 27
2-5-3 واکنش متقاطع.. 28
2-5-4 نقشه برداری اپی توپ فضائی.. 28
2-5-5 نشانههای اپی توپ.. 28
2-6 تحقیقات انجام شده در این زمینه.. 29
2-7 ابزارهای مورد استفاده.. 38
2-7-1 دات بلاتینگ.. 38
2-7- 2 نرم افزار CLC Work Bench5. 38
2-7-3 نرم افزار Mega5. 39
2-7-4 ابزار BLAST.. 39
3 مواد و روشها.. 40
3-1 تعیین نواحی آنتی ژنیک ژن CagA.. 40
3-2 تهیه باکتری هلیکو باکتر پیلوری.. 41
3-3 استخراج DNA و تعیین کمیت و کیفیت DNA استخراج شده 41
3-3-1 تعیین کمیت و کیفیت DNA با ژل آگارز.. 41
3-4 تعیین غلظت DNA استخراج شده.. 42
3-5 طراحی آغازگرها.. 42
3-6 انجام واکنش PCR.. 43
3-7 خالص سازی محصول PCR.. 44
3-7-1 بررسی بر روی ژل الکتروفورز.. 45
3-8 طرز تهیه محلولهای مورد استفاده در کلونینگ.. 45
3-8-2 محلول غلیظ آنتی بیوتیک آمپیسیلین.. 46
3-8-3 محلول غلیظ IPTG (0. 1M).. 46
3-8-4 محلول غلیظ X-Gal (20mg/ml).. 46
3-8-5 محیط کشت LB مایع.. 46
3-8-6 محیط کشت LB-Agar جامد.. 47
3-9-2 هضم pET-32a (+). 49
3-9-3 خالص سازی pET-32a (+) و قطعه هدف.. 49
3-9-4 نانودراپ محصولات خالص شده.. 50
3-9-5 انجام واکنش الحاق قطعه هدف ژن CagA با pET-32a (+). 50
3-9-6 جوان سازی باکتری DH5α.. 51
3-9-7 تهیه سلولهای مستعد DH5α.. 52
3-9-8 انتقال پلاسمید نوترکیب به باکتری.. 52
3-9-9 کشت پرگنهها و غربال گری باکتری های نوترکیب 53
3-9-10 کلونی PCR.. 53
3-9-11 استخراج پلاسمید نوترکیب.. 54
3-9 -12 تایید کلونیها از طریق هضم آنزیمی.. 55
3-10 توالی یابی.. 56
3-11 انتقال پلاسمید pET-32a (+) حاوی ژن هدف به باکتری BL21 (DE3). 56
3-12 تحریک بیان ژن هدف.. 56
3-13 استخراج پروتئین از باکتری.. 57
3-14 الکتروفورز پروتئینها به روش SDS-PAGE. 58
3-14-1 مراحل بستن ژل به صورت زیر انجام شد:.. 59
3-15 دات بلات.. 61
3-16 محلولها و بافرها.. 62
3-16-1 بافر شستشو یا محلول TBS. 62
3-16-2 محلول بلوکه کننده.. 62
3-16-3 بافر شستشو یا محلول TBS-T.. 62
3-16-4 آنتیبادی اولیه.. 62
3-16-5 آنتیبادی ثانویه.. 62
3-16-6 روش تهیه محلول رنگ آمیزی DAB.. 62
3-17 خالص سازی پروتئین.. 64
3-18 آماده سازی آنتی ژن ایمنی زا برای تزریق به مرغ 64
3-19 ایمنی زائی مرغها جهت تولید آنتی بادی اختصاصی 65
3-19-1 تزریق اولیه:.. 65
3-19-2 تزریقهای ثانویه (Booster injection).. 66
3-20 جمع آوری و ذخیره تخم مرغ.. 66
3-21 جداسازی IgY با استفاده از روش پلی اتیلن گلایکول 6000 66
3-22 بررسی IgY به روش الکتروفورز SDS-PAGE و دات بلات 67
4 نتایج و بحث.. 67
4-1 تعیین نواحی آنتی ژنیک ژن CagA.. 67
4-2 تایید آلودگی نمونههای بیوپسی.. 69
4-3 تعیین کمیت و کیفیت DNA.. 69
4-4 بررسی محصولات PCR.. 70
4-5 خالص سازی محصول PCR.. 71
4-6 هضم PET32a (+) و ژن CagA.. 71
4-7 کلونینگ ژن CagA در باکتری DH5α.. 72
4-8 تأیید صحت قطعه کلونشده در pET32a (+). 73
4-9 نتایج کلونی PCR.. 73
4-10 تایید نتایج کلونی PCR با استفاده از T7. 74
4-11 استخراج پلاسمید و انجام هضم آنزیمی.. 75
4-12 توالی یابی.. 76
4-13 آنالیز فیلوژنتیکی توالی آمینواسیدی CagA.. 76
4-14 بیان ژن.. 78
4-15 SDS-PAGE. 78
4-16 دات بلات.. 79
4-18 تولید IgY ضد هلیکو باکتر پیلوری-CagA در زرده تخم مرغ 81
5 نتیجه گیری و پیشنهادات.. 85
فهرست شکلها
شکل 4-1. نتایج نرم افزار bcepred. 68
شکل 4-2. تست اوره آز انجام شده بر روی نمونههای بیوپسی. 69
شکل 4-3. تعیین کیفیت و کمیت DNA. 70
شکل4-5. خالص سازی محصول PCR . 71
شکل4-6. هضم ناقل بیان و قطعه هدف... 72
شکل4-7. کشت خطی از تک کلونهای رشد کرده بر روی محیط کشت LB-آگار حاوی آمپی سیلین.. 73
شکل 4-8. کلونی PCR. 74
شکل4-9. کلونی PCR با استفاده از پرایمر T7 و T-terminatoor. 75
شکل 4-10. استخراج پلاسمید نوترکیب و هضم آنزیمی.. 76
شکل 4-12. بررسی بیان پروتئین نوترکیب با الکتروفورزSDS-PAGE 78
شکل 4-13. دات بلات پروتئینهای استخراج شده. 79
شکل 4-14.تعیین غلظت پروتئین با استفاده از روش برادفورد. 81
شکل 4-15.خالص سازی پروتئین و حذف باندهای غیر اختصاصی. 81
شکل 4-16. الکتروفورز SDS-PAGE به منظور بررسی پروتئین زنجیره سبک و سنگین IgY استخراج شده از زرده تخم مرغ 82
فهرست جدولها
جدول 3-1 مواد و مقادیر لازم برای انجام PCR یک واکنش.... 43
جدول3-2. برنامه حرارتی مورد استفاده جهت تکثیر نواحی آنتی ژنیک ژن CagA.. 44
جدول3-3 مواد مورد نیاز جهت تهیه محیط کشت LB مایع.. 46
جدول3-4 مواد مورد نیاز جهت تهیه محیط کشت جامد LB-Agar. 47
جدول 3-5 مواد و مقادیر لازم برای انجام واکنش هضم قطعه هدف ژنCagA.. 48
جدول 3-6. مواد و مقادیر لازم برای انجام واکنش هضم pET-32a (+) 49
جدول3-7. مواد مورد نیاز جهت انجام واکنش الحاق.. 50
جدول 3-8. مواد و مقادیر لازم برای انجام واکنش هضم پلاسمید pET32a (+)-CagA.. 55
جدول3-9. مواد مورد نیاز برای تهیه بافر Laemmli buffer samples 5X. 58
جدول3-10 مواد و مقادیر لازم جهت تهیه ژل پایینی SDS-PAGE. 58
جدول 3-11 مواد لازم جهت بستن ژل بالایی SDS-PAGE. 59
جدول3-12. مواد و مقادیر مورد نیاز برای بافر 5X تانک SDS-PAGE. 59
قیمت فایل فقط 16,900 تومان
برچسب ها : کلونینگ و بیان بخش های آنتی ژنیک سیتوتوکسین مرتبط با ژن A (CagA) هلیکو باکتر پیلوری در باکتری اشرشیا کلی و امکان سنجی تولید IgY در زرده تخم مرغ , کلونینگ , آنتی ژنیک سیتوتوکسین , ژن A (CagA) , هلیکو باکتر پیلوری , باکتری اشرشیا کلی , امکان سنجی , تولید IgY , زرده تخم مرغ , مهندسی آنتی بادی , کیت تشخیصی , ایمنوژنتیک
Google
7 results (1.07 seconds)
Search Results
کلونینگ و بیان بخشهای آنتی ژنیک سیتوتوکسین مرتبط با ژن A
arshadha.ir/پایان-نامه-ارشد-کلونینگ-و-بیان-بخشها/
Translate this page
Apr 18, 2016 - عنوان : کلونینگ و بیان بخشهای آنتی ژنیک سیتوتوکسین مرتبط با ژن A (CagA) هلیکو باکتر پیلوری در باکتری اشرشیا کلی و امکان سنجی تولید IgY در زرده تخم مرغ ...
کلونینگ و بیان بخشهای آنتی ژنیک سیتوتوکسین مرتبط با ژن A
ganj.irandoc.ac.ir/articles/799378
Translate this page
... با ژن A (CagA) هلیکو باکتر پیلوری در باکتری اشرشیاکلی و امکانسنجی تولید IgY ... ژن CagA (سیتوتوکسین مرتبط با ژن A) یکی مهمترین شاخصهای بیماری زای ... سازی بخشهای آنتی ژنیک ژن CagA و بررسی تولید IgY در زرده تخم مرغ در ابتدا بر ... هلیکوباکتر پیلوری موجود در بیوپسی معده 30 بیمار مبتلا به این باکتری جدا ...
کلونینگ و بیان بخشهای آنتی ژنیک سیتوتوکسین مرتبط با ژن A
thesis.um.ac.ir/moreinfo-57364-pg-1.html
Translate this page
کلونینگ و بیان بخشهای آنتی ژنیک سیتوتوکسین مرتبط با ژن A (CagA) هلیکو باکتر پیلوری در باکتری اشرشیا کلی و امکان سنجی تولید IgY در زرده تخم مرغ.
پیشنهادهای پژوهش رشته علوم دامی
library.um.ac.ir/index.php?option=com_content...
Translate this page
Jul 11, 2015 - اثرات سطوح بيشتر از 4 درصد گلوتامين به ازاي هر تخممرغ بر عملکرد رشد ..... کلونینگ و بیان بخشهای آنتی ژنیک سیتوتوکسین مرتبط با ژن A (CagA) هلیکو باکتر پیلوری در باکتری اشرشیا کلی و امکان سنجی تولید IgY در زرده تخم مرغ ... به موش و بررسی توانائی کاهش عفونت ناشی از هلیکو باکتر پیلوری
مقالات مشابه با مقاله: همسانه سازي و بيان ژن دومن a-1 آنتي ژن حفاظتي ...
elmnet.ir/mlt/316500
Translate this page
کلونینگ و بیان بخشهای آنتی ژنیک سیتوتوکسین مرتبط با ژن A (CagA) هلیکو باکتر پیلوری در باکتری اشرشیا کلی و امکان سنجی تولید IgY در زرده تخم مرغ.
[PDF]Production of IgY in chicken egg yolk against helicobacter pylori ... - Sid
www.sid.ir/fa/VEWSSID/J_pdf/67713870201.pdf
Translate this page
by C ﺪـﺣاوﺮﻳز نژ - Related articles
ﺗﻮﻟﻴﺪ. IgY. در زرده ﺗﺨﻢ ﻣﺮغ ﺑﺮ ﻋﻠﻴﻪ اوره. آز ﻫﻠﻴﻜﻮﺑﺎﻛﺘﺮ ﭘﻴﻠﻮري. از ﻗﻄﻌﻪ ﻧﻮﺗﺮﻛﻴﺐ. UreC. ﺣﺴﻴﻦ ﺑﺼﻴﺮي. 1 ... ﭘﺲ از اﻧﺘﻘﺎل ﺳﺎزة ﻧﻮﺗﺮﻛﻴﺐ ﺑﻪ ﺑﺎﻛﺘﺮي اﺷﺮﺷﻴﺎﻛﻠﻲ زﻳﺮﮔﻮﻧﻪ. Bl21DE3. ، ﭘﺮوﺗﺌﻴﻦ ﻧﻮﺗﺮﻛﻴﺐ ﻣﻮرد. ﻧﻈﺮ ﺑﻴﺎن ﺷﺪ ... ﺑﺎ ﺗﻮﺟﻪ ﺑﻪ ﺗﻮان ﺑﺎﻻي آﻧﺘـﻲ. ﺑـﺎدي. IgY-HpUc. در ﺷﻨﺎﺳـﺎﻳﻲ زﻳﺮواﺣـﺪ. UreC. آﻧـﺰﻳﻢ اوره. آز، اﻣﻜـﺎن .... ﻫﺎي آﻧﺘﻲ. ژﻧﻴﻚ ﺣﻔﺎﻇﺖ. ﺑﺨﺶ اﻳﻦ. ﺑﺎﻛﺘﺮي ﻧﻈﻴـﺮ. UreC. ،. HpaA. ،. FlaA. ،. CagA. ،. VacA.
[PDF]ﺑﯿﺎن و ﺗﺨﻠﯿﺺ اﻧﺘﻬﺎي ﮐﺮﺑﻮﮐﺴﯿﻞ زﯾﺮواﺣﺪ C آﻧﺰﯾﻢ اوره آز ﻫﻠﯿﮑﻮﺑﺎﮐﺘﺮ ﭘﯿﻠﻮري ﺑﻪ ﻣﻨﻈﻮر ﺗﻮﻟﯿﺪ ...
www.iau-tmuj.ir/article-1-537-en.pdf
Translate this page
by H Basiri - 2012 - Related articles
زا و آﻧﺘﯽ. ژﻧﯿﮏ اﯾﻦ ﺑﺎﮐﺘﺮي اﺳﺖ . روش ﺑﺮر. ﺳ. ﯽ: دراﯾﻦ ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ ﺗﺠﺮﺑﯽ. ،. اﺑﺘﺪا ﺑﺨﺶ اﻧﺘﻬﺎي ﮐﺮﺑﻮﮐﺴﯿﻞ زﯾﺮ واﺣﺪ. C ... ﻫﻠﯿﮑﻮﺑﺎﮐﺘﺮ ﭘﯿﻠﻮري در. E.coli. ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﺳﻠﻮل ﻣﯿﺰﺑﺎن، اﻣﮑﺎن دﺳﺘﺮﺳﯽ آﺳﺎن ﺑﻪ آﻧﺘﯽ. ژن. را ﻓﺮاﻫﻢ ﮐﺮد . ﻋﻠﯽ ... H. pylori. ﺑـﺎ ﺳـﺮﻃﺎن ﺑـﺪﺧﯿﻢ ﻣﻌـﺪه. ﻣﺮﺗﺒﻂ. اﺳﺖ و اﯾﻦ اﻣﺮ ﻣﻮﺟﺐ ﮔﺸﺘﻪ ﮐﻪ آژاﻧﺲ ﭘﮋوﻫﺶ ﺳﺮﻃﺎن. ﺳـ .... ﻫﺎي ﯾﺎداور و اﻃﻤﯿﻨـﺎن از اﯾﻤـﻦ. ﺷﺪن ﻣﺮغ. ﻫ. ﺎ ﺑﺎ اﻧﺠـﺎم اﻻﯾـﺰا، از زرده ﺗﺨـﻢ ﻣـﺮغ ﺗﺨﻠـﯿﺺ. IgY.
In order to show you the most relevant results, we have omitted some entries very similar to the 7 already displayed.
If you like, you can repeat the search with the omitted results included.
Unknown - Use precise location
- Learn more
Help Send feedback Privacy Terms